Trang chủ

Đại thực bào đóng vai trò quan trọng trong hệ thống miễn dịch của cơ thể, đóng vai trò quan trọng trong việc thực bào các tác nhân gây bệnh, điều chỉnh phản ứng miễn dịch và duy trì cân bằng mô. Thông qua phương pháp chiết xuất chính, các nhà nghiên cứu có thể tránh được những thay đổi về mặt di truyền và suy giảm chức năng có thể do nhiều dòng tế bào gây ra và trực tiếp thu được đại thực bào có hoạt tính sinh học hoàn chỉnh từ các sinh vật sống, tạo nền tảng vững chắc cho các thí nghiệm tiếp theo.

Đại thực bào nguyên phát có nguồn gốc từ tủy xương thường có hình tròn hoặc hình bầu dục khi không bị kích thích, với kích thước tế bào khác nhau, nhân nhỏ, chủ yếu là hình tròn hoặc hình bầu dục, chromatin lỏng lẻo và nhân con rõ ràng. Không bào và chất dạng hạt phổ biến trong tế bào chất và những cấu trúc này có liên quan chặt chẽ đến chức năng thực bào của chúng.

Máy ly tâm đóng vai trò quan trọng trong quá trình chiết xuất tế bào BMDM. Thông qua bước ly tâm, chúng tôi có thể tách và kết tủa tế bào hiệu quả để thu được đại thực bào tủy xương chất lượng cao. Quá trình ly tâm không chỉ giúp loại bỏ tạp chất mà còn đảm bảo độ tinh khiết và hoạt động của tế bào, đây là mắt xích quan trọng không thể thiếu trong quá trình chiết xuất.

Sau đây là các bước chi tiết và biện pháp phòng ngừa cho phương pháp chiết xuất đại thực bào chính sử dụng chuột làm ví dụ:

Chuẩn bị vật liệu thí nghiệm

Động vật thí nghiệm: Chuột C57BL/J

Thuốc thử: Môi trường nuôi cấy DMEM có hàm lượng glucose cao chứa 10% FBS, 75% ethanol, PBS vô trùng.

Thiết bị thí nghiệm: ống tiêm dùng một lần, dụng cụ phẫu thuật, ống ly tâm, máy ly tâm, đĩa nuôi cấy tế bào hoặc bình nuôi cấy, v.v.

Các bước thực nghiệm

●Gây mê và giết: Sau khi gây mê chuột, chúng được giết nhanh chóng và nhân đạo bằng cách trật khớp, tuân theo đạo đức của các thí nghiệm trên động vật và giảm thiểu đau đớn cho chuột.

●Khử trùng bề mặt: Ngâm chuột trong cốc thủy tinh chứa 75% ethanol trong 5 phút. Sau khi khử trùng kỹ lưỡng, sử dụng khăn giấy sạch để thấm bớt cồn thừa.

●Điều trị da và khớp: Sử dụng kéo đã khử trùng để rạch một đường nhỏ ở lưng chuột, xé da đến khớp bắp chân bằng tay không và loại bỏ khớp bàn chân và da.

●Lấy mẫu chân và khử trùng lần hai: Sử dụng kéo đã khử trùng để tháo rời cẩn thận các chi sau khỏi mấu chuyển lớn ở gốc đùi để tránh gãy xương. Sau khi loại bỏ các cơ, ngâm xương chân trong đĩa nuôi cấy có 75% ethanol trong 5 phút.

●Sau 5 phút, lấy xương chân ra khỏi đĩa nuôi cấy ethanol, đặt vào đĩa nuôi cấy ethanol mới và chuyển đến bệ sạch để tạo môi trường vô trùng cho các thí nghiệm tiếp theo.

Chiết xuất và cảm ứng tế bào BMDM

● Tiền xử lý xương chân: Chuyển xương chân chuột đã ngâm ethanol vào một thùng chứa đầy PBS lạnh, nhúng hoàn toàn và rửa ethanol trên bề mặt xương bằng PBS, lặp lại 3 lần để đảm bảo làm sạch kỹ lưỡng.

● Chiết xuất tủy xương: Tách xương đùi và xương chày đã rửa sạch, cắt cả hai đầu bằng kéo đã khử trùng. Sử dụng ống tiêm 1mL để hấp thụ môi trường cảm ứng lạnh, nhắm vào đầu xương và thổi tủy xương ra, thổi và rửa nhiều lần trong khoảng 3 lần cho đến khi không còn cặn tủy xương đỏ rõ ràng trong xương chân.

● Phân tán và lọc tế bào: Sử dụng pipet 5mL để thổi nhẹ môi trường chứa tế bào tủy xương để phân tán các cục tế bào. Lọc hỗn dịch qua bộ lọc tế bào 70μm để loại bỏ tạp chất và chuyển dịch lọc vào ống ly tâm 15mL.

● Ly tâm và huyền phù lại: Ly tâm ở tốc độ 1500 vòng/phút trong 5 phút và loại bỏ phần dịch nổi. Thêm đệm ly giải tế bào hồng cầu để tái huyền phù các tế bào, để yên trong 5 phút, sau đó ly tâm ở cùng tốc độ trong 5 phút và loại bỏ phần dịch nổi. Cuối cùng, tái huyền phù viên tế bào bằng môi trường cảm ứng lạnh.

● Nuôi cấy tế bào và thay thế môi trường: Đặt tế bào lên đĩa khi cần thiết. Vào ngày thứ ba, thay thế một nửa môi trường nuôi cấy để duy trì môi trường nuôi cấy ổn định; vào ngày thứ năm, thay thế toàn bộ môi trường nuôi cấy mới để đáp ứng nhu cầu tăng trưởng và biệt hóa tế bào; vào ngày thứ bảy, các tế bào đạt đến trạng thái có thể sử dụng được.

Ghi chú

●Tế bào BMDM không thể chuyển gen: Do đặc điểm sinh học đặc biệt của tế bào BMDM, chúng không phù hợp cho các hoạt động chuyển gen.

●Tránh tiêu hóa trypsin: Trypsin thường được sử dụng để tách các tế bào bám dính, nhưng không phù hợp với tế bào BMDM. Hoạt động phân giải protein của trypsin sẽ phá hủy màng tế bào và các protein chính, khiến tế bào bất hoạt và không sử dụng được cho các thí nghiệm tiếp theo. Do đó, không sử dụng trypsin để xử lý tế bào BMDM.

●Nên sử dụng dụng cụ cạo tế bào: Do hạn chế về khả năng chuyển gen và tiêu hóa trypsin, nên sử dụng dụng cụ cạo tế bào để cạo nhẹ tế bào BMDM.

●Tránh thay đổi thường xuyên các hộp đựng nuôi cấy: Tế bào BMDM rất dễ vỡ và nhạy cảm với môi trường. Nên cấy trực tiếp chúng vào đĩa để thực hiện thí nghiệm sau khi thu thập. Việc thay đổi thường xuyên các hộp đựng nuôi cấy có thể gây ra nhiễu loạn vật lý, khiến tế bào va chạm và kéo, do đó làm hỏng tế bào và ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.

Trên đây là quy trình chi tiết về chiết xuất tế bào BMDM sẽ hữu ích cho người dùng. Trong các thí nghiệm sinh học, Welso có thể cung cấp cho bạn tất cả các dụng cụ thí nghiệm mà bạn cần. Điều đáng nói là dòng máy ly tâm của chúng tôi là trợ thủ không thể thiếu trong thí nghiệm. Chúng tôi tập trung vào việc cung cấp các sản phẩm máy ly tâm chất lượng cao cho khách hàng toàn cầu, bao gồm máy ly tâm tốc độ thấp, máy ly tâm tốc độ cao, máy ly tâm lạnh, máy ly tâm mini và máy ly tâm sàn công suất lớn. Nếu bạn quan tâm đến sản phẩm của chúng tôi, vui lòng liên hệ với chúng tôi kịp thời và bạn sẽ nhận được báo giá tốt nhất.