Trang chủ

Trong lĩnh vực khoa học thần kinh, việc nghiên cứu chức năng của các tế bào nội mô mạch máu não và mạch máu nhỏ là rất quan trọng để hiểu được các quá trình sinh lý bình thường của não và cơ chế phát triển bệnh. Công nghệ chiết xuất tế bào nội mô mạch máu nhỏ não nguyên phát đã được sử dụng rộng rãi, chủ yếu bằng cách lấy các tế bào này từ mô hình động vật, để khám phá sâu sắc cấu trúc, chức năng và tương tác của các tế bào nội mô. Công nghệ này cung cấp một tài liệu tham khảo quan trọng để nghiên cứu cơ chế bệnh sinh của các bệnh liên quan và phát triển các loại thuốc điều trị có mục tiêu, đồng thời thúc đẩy tiến bộ khoa học trong lĩnh vực bệnh mạch máu não và bệnh thoái hóa thần kinh.

Welso đã cẩn thận biên soạn một giao thức thử nghiệm để tách và chiết xuất tế bào nội mô vi mạch não (BMEC) bằng cách sử dụng máy ly tâm tốc độ thấp. Bài viết này nhằm mục đích cung cấp cho nhân viên phòng thí nghiệm một hướng dẫn kỹ thuật ngắn gọn và dễ hiểu, trình bày chi tiết các bước chính và biện pháp phòng ngừa của thí nghiệm, đồng thời giúp các nhà nghiên cứu khoa học nhanh chóng nắm vững các điểm chính của hoạt động. Chúng tôi hy vọng rằng thông qua việc chia sẻ này, chúng tôi có thể cung cấp hướng dẫn và hỗ trợ thực tế cho nghiên cứu trong các lĩnh vực liên quan và đẩy nhanh tiến độ nghiên cứu về mạch máu não và khoa học thần kinh.

Giới thiệu về BMEC

Tế bào nội mô mạch máu não nguyên phát (BMEC) là một loại tế bào quan trọng được phân lập, nuôi cấy và nhân rộng từ mô não. Chúng chủ yếu phân bố ở thành mạch máu não và tạo thành thành phần cốt lõi của hàng rào máu não. BMEC đóng vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh sự trao đổi chất qua hàng rào máu não, duy trì sự ổn định của môi trường bên trong não và bảo vệ chống lại sự xâm nhập của các chất có hại từ thế giới bên ngoài. Chúng là một mô hình tế bào quan trọng để nghiên cứu chức năng mạch máu não và cơ chế bệnh tật.

Vật liệu thí nghiệm

Động vật thí nghiệm: Chuột SD (4-6 tuần tuổi, đực)

Dụng cụ và vật tư tiêu hao: kéo phẫu thuật lớn, kẹp, ống ly tâm 50 mL, đĩa 6 giếng

Thuốc thử và dung dịch: 75% ethanol, nước muối, collagenase, 25% BSA, poly-lysine

Môi trường nuôi cấy: Môi trường nuôi cấy cơ bản DMEM/F12, môi trường nuôi cấy hoàn chỉnh DMEM/F12

Dụng cụ phòng thí nghiệm

Bàn siêu sạch: để vận hành vô trùng

Máy ly tâm tốc độ thấp: để tách tế bào

Lò ấp CO2: cung cấp môi trường thích hợp cho nuôi cấy tế bào

Quy trình thử nghiệm

Xử lý động vật thí nghiệm

●Sau khi gây mê chuột, ngâm chúng trong cồn 75% trong khoảng 1 phút để khử trùng bề mặt.

Lấy não

● Cắt da đầu, nhanh chóng và loại bỏ hoàn toàn não, và đặt vào môi trường nuôi cấy cơ bản DMEM/F12 đã được làm lạnh trước.

Làm sạch mô

● Trong một băng ghế sạch, loại bỏ các cục máu đông bên ngoài, màng não và các mạch máu bên ngoài của não (thực hiện trong một đĩa).

● Loại bỏ chất trắng (cấu trúc rời rạc) và giữ lại chất xám (phần não trái và não phải hình vỏ sò).

Rửa

●Rửa mô não nhiều lần bằng môi trường nuôi cấy đã được làm lạnh trước ở 4°C để loại bỏ tạp chất.

Cắt và xử lý sơ bộ

●Cắt mô não thành các mảnh nhỏ khoảng 1 mm³ và chuyển vào ống ly tâm vô trùng 50 mL.

●Tiếp tục băm nhỏ mô và nhẹ nhàng dùng pipet để phân tán các mảnh mô.

Ly tâm

● Ly tâm ở tốc độ 900 vòng/phút trong 4 phút ở nhiệt độ phòng và loại bỏ phần dịch nổi. Thêm 5 mL môi trường DMEM/F12 không có huyết thanh và trộn đều bằng pipet.

● Thêm 10 mL môi trường và 100 μL collagenase II và tiêu hóa ở 37°C trong 30 đến 45 phút.

Chuẩn bị đĩa 6 giếng

●Đồng thời, sử dụng 1 mL poly-lysine để phủ lên đĩa 6 giếng và ủ ở 37°C.

Xử lý sau khi tiêu hóa

●Sau khi tiêu hóa, thêm môi trường để trung hòa, ly tâm ở tốc độ 900 vòng/phút trong 10 phút ở nhiệt độ phòng và loại bỏ phần dịch nổi.

●Thêm 15 mL dung dịch BSA 25% và ly tâm ở tốc độ 2000 vòng/phút trong 20 phút ở nhiệt độ phòng.

Chiết xuất tế bào đích

● Sau khi ly tâm, có thể thấy sự phân tầng: chất kết tủa màu đỏ sẫm ở lớp dưới là tế bào vi mạch não.

● Nhẹ nhàng rửa poly-L-lysine trong đĩa 6 giếng bằng nước muối và rửa lại hai lần.

Phục hồi tế bào và nuôi cấy

● Loại bỏ cặn mạch máu não dưới, thêm nước muối sinh lý và trộn đều, sau đó ly tâm ở tốc độ 900 vòng/phút trong 5 phút ở nhiệt độ phòng.

● Phục hồi tế bào bằng môi trường hoàn chỉnh DMEM/F12 mới, chuyển vào đĩa 6 giếng đã tráng và nuôi cấy trong lồng ấp.

Thông qua quy trình thử nghiệm này, chúng tôi đã chiết xuất và tách thành công các tế bào nội mô vi mạch não chuột, cung cấp cơ sở thử nghiệm vững chắc cho các nghiên cứu tiếp theo. Trong suốt quá trình, máy ly tâm tốc độ thấp là một công cụ chính giúp chúng tôi tách tế bào hiệu quả và tinh chế quần thể tế bào mục tiêu. Để đảm bảo độ chính xác và an toàn của thí nghiệm, Welso đã biên soạn một số điểm vận hành của máy ly tâm tốc độ thấp để người vận hành tham khảo.

Kiểm tra và bố trí thiết bị

● Đảm bảo máy ly tâm được đặt ổn định trên một mặt bàn chắc chắn để tránh mất ổn định do rung hoặc nghiêng.

● Kiểm tra thiết bị trước khi sử dụng và tập trung kiểm tra rotor và phớt để đảm bảo không có hư hỏng hoặc lỏng lẻo.

Bảo vệ khi vận hành

● Đeo kính bảo hộ và găng tay phòng thí nghiệm trong quá trình vận hành để tránh chất lỏng bắn vào gây tổn thương cho da và mắt.

Tốc độ và tải trọng

● Chú ý đến tốc độ tối đa và tải trọng tối đa của thiết bị, không vượt quá phạm vi tải trọng của máy ly tâm.

● Chọn tốc độ và thời gian ly tâm phù hợp theo yêu cầu thực nghiệm. Tốc độ và thời gian nên được điều chỉnh theo mật độ mẫu, mục đích tách và thể tích để tránh ảnh hưởng đến hiệu quả tách do cài đặt thông số không phù hợp.

Chuẩn bị và nạp mẫu

● Trước khi đưa mẫu vào máy ly tâm, đảm bảo ống ly tâm, nắp, xô và bộ chuyển đổi được cân bằng chính xác trên cân, dung sai trọng lượng thường không quá 1g, yêu cầu độ chính xác không quá 0,1g và đáp ứng các yêu cầu của hướng dẫn sử dụng thiết bị.

● Các vật liệu được đổ vào ống ly tâm phải có mật độ tương tự nhau để tránh rung động do phân bổ tải không đều.

● Sức chứa mẫu không được vượt quá giới hạn sức chứa tối đa của ống ly tâm hoặc rôto để tránh thiết bị mất cân bằng hoặc hư hỏng.

● Mẫu phải được đặt đối xứng trong rôto để đảm bảo lực ly tâm được phân bổ đều.

Thông số kỹ thuật vận hành

●Không được mở hoặc đóng nắp khi máy ly tâm đang chạy để tránh thương tích ngoài ý muốn.

●Sau khi ly tâm, hãy đảm bảo rằng rotor dừng hoàn toàn trước khi mở nắp. Khi lấy mẫu ra, hãy cẩn thận tránh tiếp xúc với ống mẫu nhiệt độ cao hoặc chất lỏng bắn vào.

Vệ sinh và bảo dưỡng

●Sau khi sử dụng, vệ sinh thiết bị và rotor kịp thời để giữ cho thiết bị sạch sẽ và tránh bị nhiễm bẩn hoặc ăn mòn.

●Kiểm tra thường xuyên tình trạng hoạt động của máy ly tâm để đảm bảo tính ổn định và độ tin cậy lâu dài của thiết bị.

●Bằng cách tuân thủ các biện pháp phòng ngừa trên, bạn có thể đảm bảo an toàn cho các hoạt động thử nghiệm và kéo dài tuổi thọ của thiết bị.

Máy ly tâm là thiết yếu trong nhiều thí nghiệm tách và chiết xuất tế bào. Việc tuân thủ nghiêm ngặt các thông số vận hành máy ly tâm không chỉ có thể đảm bảo an toàn cho thí nghiệm mà còn kéo dài tuổi thọ của thiết bị và đảm bảo độ tin cậy của kết quả thí nghiệm. Welso là nhà cung cấp máy ly tâm chuyên nghiệp. Bạn có thể tìm hiểu thêm về các tính năng chi tiết và thông số kỹ thuật của máy ly tâm tốc độ thấp thông qua trang sản phẩm của chúng tôi. Chúng tôi cũng hoan nghênh bạn liên hệ với chúng tôi bất cứ lúc nào để có được báo giá phù hợp nhất.