Trang chủ

Máy đọc vi mạch là một thiết bị phòng thí nghiệm thông dụng được sử dụng rộng rãi trong phép đo nồng độ protein và các thí nghiệm sinh hóa khác. Nguyên lý của nó dựa trên phương pháp hấp thụ ánh sáng, xác định nồng độ của chất mục tiêu trong mẫu bằng cách đo độ hấp thụ ánh sáng của dung dịch mẫu ở bước sóng cụ thể. Khi sử dụng máy đọc vi mạch, protein hoặc các chất sinh hóa khác trong mẫu thường phản ứng với thuốc thử màu cụ thể để tạo ra sản phẩm có đặc tính hấp thụ ánh sáng cụ thể. Thiết bị phát ra ánh sáng có bước sóng cụ thể và sau khi đi qua mẫu, máy dò sẽ đo cường độ của ánh sáng truyền qua.

Bằng cách so sánh độ hấp thụ với đường cong chuẩn, nồng độ của chất mục tiêu trong mẫu có thể được tính toán chính xác. Đường cong chuẩn thường được tạo thành từ một loạt các mẫu chuẩn có nồng độ đã biết và độ hấp thụ của nó được sử dụng để hiệu chuẩn đầu đọc vi mạch để đảm bảo độ chính xác của kết quả đo. Độ nhạy và độ chính xác cao của đầu đọc vi mạch khiến nó trở thành một công cụ thiết yếu cho các thí nghiệm sinh hóa như đo nồng độ protein, phân tích hoạt động của enzyme và thí nghiệm tăng sinh tế bào.

Protein là một đại phân tử sinh học quan trọng trong các sinh vật sống và việc xác định hàm lượng của nó có ý nghĩa to lớn trong nghiên cứu khoa học sinh học và ngành công nghệ sinh học. Máy đọc vi mạch là một thiết bị chính xác được sử dụng để phát hiện nồng độ của các phân tử sinh học, phân tích định lượng các phân tử mục tiêu dựa trên sự thay đổi màu sắc do các phản ứng xúc tác bởi enzyme tạo ra.

Welso chia sẻ phương pháp BCA (phương pháp đo màu) để xác định nồng độ protein. Nguyên lý là protein phản ứng với các ion đồng (Cu²⁺) trong điều kiện kiềm để tạo thành phức hợp màu tím-xanh. Phức hợp có đỉnh hấp thụ đặc trưng ở bước sóng cụ thể (thường là 562 nm) và độ hấp thụ của nó tỷ lệ thuận tuyến tính với nồng độ protein trong mẫu. Bằng cách đo độ hấp thụ bằng máy đọc enzyme và so sánh với đường chuẩn, nồng độ protein trong mẫu có thể được tính toán chính xác. Phương pháp này được sử dụng rộng rãi để xác định nhanh nồng độ protein vì độ nhạy cao và thao tác đơn giản.

Mục đích thí nghiệm 

Nắm vững cách sử dụng máy đọc vi mạch và làm quen với quy trình vận hành và chức năng của nó.

Tìm hiểu các nguyên tắc cơ bản và các bước vận hành của phân tích định lượng protein.

Đo nồng độ protein bằng phương pháp BCA và xác minh độ chính xác của kết quả thực nghiệm.

Vật liệu và dụng cụ thí nghiệm 

Vật liệu

Dung dịch protein chuẩn (như albumin huyết thanh bò)

Mẫu dung dịch protein cần thử nghiệm

Dung dịch BCA

Đĩa vi mô 96 giếng

Thuốc thử 

Đồng sunfat

Natri sunfat

Natri hiđroxit, v.v.

Dụng cụ 

Máy đọc ELISA

Cân điện tử

Pipettor

Bể nước ổn nhiệt

Các bước thử nghiệm 

●Thiết lập đường cong chuẩn

A. Chuẩn bị dung dịch BCA theo hướng dẫn của bộ dụng cụ.

B. Pha loãng dung dịch chuẩn protein với nước khử ion theo các gradient nồng độ khác nhau (như 0, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256 ug/mL)

C. Thêm dung dịch chuẩn pha loãng vào mỗi microplate 96 giếng, 100μL cho mỗi giếng.

D. Thêm 100μL dung dịch BCA vào mỗi giếng và trộn đều.

E. Đặt microplate vào máy đọc ELISA và đo giá trị hấp thụ ở bước sóng 562nm

Thiết lập đường cong chuẩn với nồng độ protein là trục ngang và giá trị hấp thụ là trục dọc

●Xác định mẫu

A. Pha loãng mẫu protein cần thử nghiệm bằng nước khử ion đến nồng độ thích hợp.

B. Thêm các mẫu đã pha loãng vào microplate 96 giếng, mỗi giếng 100 μL.

C. Thêm 100 μL dung dịch BCA vào mỗi giếng và trộn đều.

D. Đặt microplate vào máy đọc ELISA và đo giá trị hấp thụ ở bước sóng 562 nm.

● Phân tích kết quả

Dựa trên giá trị hấp thụ của mẫu đo được, tìm protein tương ứng trên đường chuẩn, sau đó tính nồng độ protein của dung dịch mẫu dựa trên thể tích mẫu.

Phương pháp BCA là phương pháp phân tích định lượng protein thường được sử dụng với ưu điểm là thao tác đơn giản, độ nhạy cao và độ đặc hiệu mạnh. Trong quá trình thí nghiệm, cần đặc biệt chú ý đến việc ngăn ngừa protein bị biến tính, phân hủy và nhiễm bẩn để đảm bảo độ chính xác của kết quả. Kết quả của thí nghiệm này cho thấy phương pháp BCA có thể xác định hiệu quả nồng độ của mẫu protein và cung cấp dữ liệu hỗ trợ đáng tin cậy cho nghiên cứu protein tiếp theo.

Thí nghiệm này đã sử dụng thành công thiết bị ELISA và phương pháp BCA để xác định nồng độ mẫu protein, xác minh tính khả thi của phương pháp và cung cấp tài liệu tham khảo quan trọng cho phân tích định lượng protein.