Blog

Mikro plaka okuyucu, protein konsantrasyonu ölçümünde ve diğer biyokimyasal deneylerde yaygın olarak kullanılan yaygın bir laboratuvar cihazıdır. Prensibi, belirli bir dalga boyunda numune çözeltisinin ışık emilimini ölçerek numunedeki hedef maddenin konsantrasyonunu belirleyen ışık emilimi yöntemine dayanır. Bir mikro plaka okuyucu kullanıldığında, numunedeki protein veya diğer biyokimyasal maddeler genellikle belirli bir renk reaktifiyle reaksiyona girerek belirli ışık emilimi özelliklerine sahip bir ürün üretir. Cihaz belirli bir dalga boyunda ışık yayar ve numuneden geçtikten sonra dedektör iletilen ışığın yoğunluğunu ölçer.

Absorbansı standart eğri ile karşılaştırarak, numunedeki hedef maddenin konsantrasyonu doğru bir şekilde hesaplanabilir. Standart eğri genellikle bilinen konsantrasyonlardaki bir dizi standart numuneden oluşur ve absorbansı, ölçüm sonuçlarının doğruluğunu sağlamak için mikro plaka okuyucusunu kalibre etmek için kullanılır. Mikro plaka okuyucusunun yüksek hassasiyeti ve yüksek kesinliği, onu protein konsantrasyonu ölçümü, enzim aktivite analizi ve hücre çoğalması deneyleri gibi biyokimyasal deneyler için olmazsa olmaz bir araç haline getirir.

Protein canlı organizmalarda önemli bir biyomakromoleküldür ve içeriğinin belirlenmesi biyolojik bilim araştırmaları ve biyoteknoloji endüstrisinde büyük önem taşır. Mikroplaka okuyucu, enzim katalizli reaksiyonlar tarafından üretilen renk değişimine dayanarak hedef molekülleri kantitatif olarak analiz eden biyomoleküllerin konsantrasyonunu tespit etmek için kullanılan hassas bir cihazdır.

Welso, protein konsantrasyonunu belirlemek için BCA yöntemini (kolorimetrik yöntem) paylaştı. Prensip, proteinin alkali koşullar altında bakır iyonlarıyla (Cu²⁺) reaksiyona girerek mor-mavi bir kompleks oluşturmasıdır. Kompleks, belirli bir dalga boyunda (genellikle 562 nm) karakteristik bir emilim tepe noktasına sahiptir ve emilimi, numunedeki protein konsantrasyonuyla doğrusal olarak orantılıdır. Absorbansı bir enzim okuyucuyla ölçerek ve standart eğriyle karşılaştırarak, numunedeki protein konsantrasyonu doğru bir şekilde hesaplanabilir. Bu yöntem, yüksek hassasiyeti ve basit çalışması nedeniyle protein konsantrasyonunun hızlı bir şekilde belirlenmesi için yaygın olarak kullanılır.

Deneysel Amaç 

Mikroplaka okuyucunun kullanımında ustalaşın ve çalışma süreci ve işlevlerine aşina olun.

Protein kantitatif analizinin temel prensiplerini ve çalışma adımlarını öğrenin.

BCA yöntemi ile protein konsantrasyonunu ölçün ve deneysel sonuçların doğruluğunu doğrulayın.

Deneysel malzemeler ve aletler 

Malzemeler

Standart protein solüsyonu (sığır serum albümini gibi)

Test edilecek protein solüsyonu örneği

BCA solüsyonu

96-kuyucuklu mikro plaka

Reaktifler 

Bakır sülfat

Sodyum sülfat

Sodyum hidroksit vb.

Enstrümanlar 

ELISA okuyucu

Elektronik terazi

Pipetörler

Termostatik su banyosu

Deneysel adımlar 

●Standart eğrilerin ayarlanması

A. Kit talimatlarına göre BCA solüsyonunu hazırlayın.

B. Protein standart solüsyonunu deiyonize suyla farklı konsantrasyon gradyanlarına (örneğin 0, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256 ug/mL) seyreltin

C. Seyreltilmiş standart solüsyonu her 96 kuyulu mikro plakaya, kuyu başına 100 μL ekleyin.

D. Her kuyuya 100 μL BCA solüsyonu ekleyin ve iyice karıştırın.

E. Mikro plakayı bir ELISA okuyucusuna yerleştirin ve 562 nm dalga boyunda absorbans değerini ölçün

Yatay eksen olarak protein konsantrasyonu ve dikey eksen olarak absorbans değeri ile bir standart eğri oluşturun

●Numune belirleme

A. Test edilecek protein örneğini uygun bir konsantrasyona kadar deiyonize suyla seyreltin.

B. Seyreltilmiş örnekleri 96 kuyulu bir mikro plakaya ekleyin, her kuyuya 100 μL ekleyin.

C. Her kuyuya 100 μL BCA solüsyonu ekleyin ve iyice karıştırın.

D. Mikro plakayı bir ELISA okuyucusuna yerleştirin ve 562 nm dalga boyunda absorbans değerini ölçün.

●Sonuç analizi

Ölçülen numunenin absorbans değerine göre standart eğri üzerinde karşılık gelen proteini bulun ve ardından numune hacmine göre numune çözeltisinin protein konsantrasyonunu hesaplayın.

BCA yöntemi, basit işlem, yüksek hassasiyet ve güçlü özgüllük avantajlarına sahip yaygın olarak kullanılan bir protein kantitatif analiz yöntemidir. Deney sırasında, sonuçların doğruluğunu sağlamak için protein denatürasyonunu, bozunmasını ve kontaminasyonunu önlemeye özel dikkat gösterilmelidir. Bu deneyin sonuçları, BCA yönteminin protein örneklerinin konsantrasyonunu etkili bir şekilde belirleyebileceğini ve sonraki protein araştırmaları için güvenilir veri desteği sağlayabileceğini göstermektedir.

Bu deneyde ELISA cihazı ve BCA yöntemi kullanılarak protein örneklerinin konsantrasyonu başarıyla belirlendi, yöntemin uygulanabilirliği doğrulandı ve protein kantitatif analizi için önemli bir referans sağlandı.