Блог

Микропланшетный ридер — это обычный лабораторный прибор, широко используемый при измерении концентрации белка и других биохимических экспериментах. Его принцип основан на методе поглощения света, который определяет концентрацию целевого вещества в образце путем измерения поглощения света раствором образца на определенной длине волны. При использовании микропланшетного ридера белок или другие биохимические вещества в образце обычно реагируют с определенным цветным реагентом, образуя продукт с определенными характеристиками поглощения света. Прибор излучает свет определенной длины волны, и после прохождения через образец детектор измеряет интенсивность прошедшего света.

равнивая поглощение со стандартной кривой, можно точно рассчитать концентрацию целевого вещества в образце. Стандартная кривая обычно создается из серии стандартных образцов известных концентраций, а ее поглощение используется для калибровки микропланшетного ридера для обеспечения точности результатов измерений. Высокая чувствительность и высокая точность микропланшетного ридера делают его важным инструментом для биохимических экспериментов, таких как измерение концентрации белка, анализ активности ферментов и эксперименты по пролиферации клеток.

Белок является важной биомакромолекулой в живых организмах, и определение его содержания имеет большое значение в биологических научных исследованиях и биотехнологической промышленности. Микропланшетный ридер — это точный инструмент, используемый для определения концентрации биомолекул, который количественно анализирует целевые молекулы на основе изменения цвета, вызванного реакциями, катализируемыми ферментами.

Welso поделился методом BCA (колориметрический метод) для определения концентрации белка. Принцип заключается в том, что белок реагирует с ионами меди (Cu²⁺) в щелочных условиях, образуя фиолетово-синий комплекс. Комплекс имеет характерный пик поглощения на определенной длине волны (обычно 562 нм), а его поглощение линейно пропорционально концентрации белка в образце. Измеряя поглощение с помощью ферментного ридера и сравнивая его со стандартной кривой, можно точно рассчитать концентрацию белка в образце. Этот метод широко используется для быстрого определения концентрации белка из-за его высокой чувствительности и простоты эксплуатации.

Экспериментальная цель 

Освойте использование микропланшетного ридера и ознакомьтесь с его работой и функциями.

Изучите основные принципы и этапы количественного анализа белков.

Измерьте концентрацию белка методом BCA и проверьте точность экспериментальных результатов.

Экспериментальные материалы и инструменты 

Материалы

Стандартный белковый раствор (например, бычий сывороточный альбумин)

Образец белкового раствора для тестирования

Раствор BCA

96-луночный микропланшет

Реагенты 

Медный купорос

Сульфат натрия

Гидрид натрия и т. д.

Инструменты 

Считыватель ELISA

Электронные весы

Пипетторы

Термостатическая водяная баня

Экспериментальные шаги 

●Настройка стандартных кривых

A. Приготовьте раствор BCA в соответствии с инструкциями к набору.

B. Разбавьте стандартный раствор белка деионизированной водой до различных градиентов концентрации (например, 0, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256 мкг/мл)

C. Добавьте разбавленный стандартный раствор в каждый 96-луночный микропланшет, по 100 мкл на лунку.

D. Добавьте 100 мкл раствора BCA в каждую лунку и хорошо перемешайте.

E. Поместите микропланшет в считыватель ELISA и измерьте значение поглощения на длине волны 562 нм.

Постройте стандартную кривую с концентрацией белка в качестве горизонтальной оси и значением поглощения в качестве вертикальной оси.

●Определение образца

A. Разбавьте образец белка для тестирования деионизированной водой до соответствующей концентрации.

B. Добавьте разбавленные образцы в 96-луночный микропланшет, по 100 мкл в каждую лунку.

C. Добавьте 100 мкл раствора BCA в каждую лунку и хорошо перемешайте.

D. Поместите микропланшет в считыватель ELISA и измерьте значение поглощения при длине волны 562 нм.

●Анализ результатов

На основе значения поглощения измеренного образца найдите соответствующий белок на стандартной кривой, а затем рассчитайте концентрацию белка в растворе образца на основе объема образца.

Метод BCA является широко используемым методом количественного анализа белков с преимуществами простоты эксплуатации, высокой чувствительности и сильной специфичности. Во время эксперимента особое внимание следует уделять предотвращению денатурации, деградации и загрязнения белков для обеспечения точности результатов. Результаты этого эксперимента показывают, что метод BCA может эффективно определять концентрацию образцов белков и обеспечивать надежную поддержку данных для последующих исследований белков.

В этом эксперименте успешно использовались инструмент ELISA и метод BCA для определения концентрации образцов белка, была проверена осуществимость метода и предоставлена важная справочная информация для количественного анализа белка.