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대식세포는 신체의 면역 체계에 필수적이며, 병원균을 식세포화하고, 면역 반응을 조절하고, 조직 항상성을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. 연구자들은 1차 추출 방법을 통해 세포주의 여러 계대에 의해 발생할 수 있는 유전적 변화와 기능 저하를 피할 수 있으며, 생물체로부터 완전한 생물학적 활동을 가진 대식세포를 직접 얻을 수 있어 후속 실험을 위한 견고한 토대를 마련합니다.

일차 골수 유래 대식세포는 자극이 없을 때 보통 둥글거나 타원형이며, 세포 크기가 다양하고, 핵은 작고, 대부분 둥글거나 타원형이며, 느슨한 크로마틴과 명확한 핵소체가 있습니다. 세포질에는 액포와 과립 물질이 흔하며, 이러한 구조는 식세포 작용과 밀접한 관련이 있습니다.

원심분리기는 BMDM 세포 추출 공정에서 중요한 역할을 합니다. 원심분리 단계를 통해 세포를 효과적으로 분리하고 침전시켜 고품질의 골수 대식세포를 얻을 수 있습니다. 원심분리 공정은 불순물을 제거하는 데 도움이 될 뿐만 아니라 세포의 순도와 활성을 보장하는데, 이는 추출 공정에서 없어서는 안 될 핵심 고리입니다.

다음은 마우스를 예로 들어 1차 대식세포 추출 방법에 대한 자세한 단계와 예방 조치입니다.

실험 재료 준비

실험 동물: C57BL/J 마우스

시약: 10% FBS, 75% 에탄올, 멸균 PBS를 함유한 DMEM 고포도당 배양 배지.

실험 장비: 일회용 주사기, 수술 도구, 원심분리관, 원심분리기, 세포 배양 플레이트 또는 배양 플라스크 등

실험 단계

●마취 및 도살: 생쥐를 마취한 후 동물 실험의 윤리를 따르고 생쥐의 고통을 최소화하면서 탈구로 신속하고 인도적으로 도살했습니다.

●표면 소독: 생쥐를 75% 에탄올이 들어 있는 비이커에 5분간 담가둡니다. 철저히 소독한 후 깨끗한 종이 타월로 과도한 알코올을 흡수합니다.

●피부 및 관절 치료: 살균된 가위를 사용하여 생쥐의 등에 작은 절개를 하고 맨손으로 종아리 관절까지 피부를 찢은 후 발 관절과 피부를 제거합니다.

●다리 샘플링 및 2차 소독: 살균된 가위를 사용하여 허벅지 뿌리의 대퇴골 돌기에서 뒷다리를 조심스럽게 분해하여 골절을 방지합니다. 근육을 제거한 후 다리 뼈를 75% 에탄올 배양 접시에 5분간 담가둡니다.

●5분 후 에탄올 배양접시에서 다리뼈를 꺼내어 새로운 에탄올 배양접시에 넣고 클린벤치로 옮겨 이후 실험을 위한 무균 환경을 마련합니다.

BMDM 세포 추출 및 유도

● 다리뼈 전처리: 에탄올에 담근 마우스 다리뼈를 차가운 PBS로 채워진 용기에 옮기고, 뼈 표면의 에탄올을 PBS로 완전히 담근 후 헹군 다음, 3번 반복하여 철저히 세척합니다.

● 골수 추출: 세척한 대퇴골과 경골을 분리하고, 멸균 가위로 양쪽 끝을 자릅니다. 1mL 주사기를 사용하여 차가운 유도 배지를 흡수하고, 뼈 끝을 조준하여 골수를 불어내고, 다리뼈에 뚜렷한 붉은 골수 잔류물이 없을 때까지 약 3번 반복하여 불어내고 세척합니다.

● 세포 분산 및 여과: 5mL 피펫을 사용하여 골수 세포가 들어 있는 배지를 부드럽게 불어 세포 덩어리를 분산시킵니다. 현탁액을 70μm 세포 필터로 여과하여 불순물을 제거하고 여과액을 15mL 원심분리관으로 옮깁니다.

● 원심분리 및 재현탁: 1500rpm에서 5분간 원심분리하고 상층액을 버립니다. 적혈구 용해 완충액을 첨가하여 세포를 재현탁시키고 5분간 방치한 다음 동일한 속도로 5분간 원심분리하고 상층액을 버립니다. 마지막으로 세포 펠릿을 차가운 유도 배지로 재현탁합니다.

● 세포 배양 및 배지 교체: 필요에 따라 세포를 도말합니다. 3일째에 배양 배지의 절반을 교체하여 안정적인 배양 환경을 유지했습니다. 5일째에 세포 성장 및 분화의 필요성을 충족시키기 위해 전체 양의 신선한 배양 배지를 교체했습니다. 7일째에 세포는 사용 가능한 상태에 도달했습니다.

참고사항

●BMDM 세포는 통과할 수 없음: BMDM 세포의 특별한 생물학적 특성으로 인해 통과 작업에 적합하지 않습니다.

●트립신 소화를 피하십시오: 트립신은 종종 부착 세포를 분리하는 데 사용되지만 BMDM 세포에는 적합하지 않습니다. 트립신의 단백질 분해 활성은 세포막과 주요 단백질을 파괴하여 세포를 불활성화시키고 후속 실험에 사용할 수 없게 합니다. 따라서 BMDM 세포를 처리하는 데 트립신을 사용하지 마십시오.

●세포 스크레이퍼를 사용하는 것이 좋습니다: 통과 및 트립신 소화의 한계로 인해 세포 스크레이퍼를 사용하여 BMDM 세포를 부드럽게 긁는 것이 좋습니다.

●배양 용기를 자주 바꾸지 마십시오: BMDM 세포는 취약하고 환경에 민감합니다. 획득 후 실험을 위해 직접 도말하는 것이 좋습니다. 배양 용기를 자주 바꾸면 물리적 교란이 발생하여 세포 충돌 및 당김이 발생하여 세포가 손상되고 실험 결과에 영향을 줄 수 있습니다.

위의 내용은 사용자에게 도움이 될 BMDM 세포 추출의 자세한 과정입니다. 생물학 실험에서 Welso는 필요한 모든 실험 기구를 제공할 수 있습니다. 특히 원심분리기 시리즈는 실험에 없어서는 안 될 보조 도구라는 점을 언급할 가치가 있습니다. 저희는 저속 원심분리기, 고속 원심분리기, 냉장 원심분리기, 미니 원심분리기, 대용량 바닥 원심분리기를 포함하여 글로벌 고객에게 고품질 원심분리기 제품을 제공하는 데 중점을 두고 있습니다. 저희 제품에 관심이 있으시면 제때 연락주시면 최상의 견적을 받으실 수 있습니다.