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신경과학 분야에서 뇌혈관 및 미세혈관 내피세포의 기능을 연구하는 것은 뇌의 정상적인 생리적 과정과 질병 발병 메커니즘을 이해하는 데 중요합니다. 일차 뇌 미세혈관 내피세포 추출 기술은 주로 동물 모델에서 이러한 세포를 얻어 내피세포의 구조, 기능 및 상호 작용을 심층적으로 탐구하는 데 널리 사용되었습니다. 이 기술은 관련 질병의 병인을 연구하고 표적 치료제를 개발하는 데 중요한 참고 자료를 제공하며 뇌혈관 질환 및 신경 퇴행성 질환 분야의 과학적 진보를 촉진합니다.

웰소는 저속 원심분리기를 사용하여 뇌 미세혈관 내피세포(BMEC)를 분리하고 추출하기 위한 실험 프로토콜을 신중하게 작성했습니다. 이 기사는 실험실 인력에게 간결하고 이해하기 쉬운 기술 가이드를 제공하고, 실험의 주요 단계와 예방 조치를 자세히 제시하며, 과학 연구자들이 작업의 핵심 요점을 빠르게 숙지하도록 돕는 것을 목표로 합니다. 이 공유를 통해 관련 분야의 연구에 대한 실질적인 지침과 지원을 제공하고 뇌혈관 및 신경과학 연구의 진전을 가속화할 수 있기를 바랍니다.

BMEC 소개

1차 뇌 미세혈관 내피세포(BMEC)는 뇌 조직에서 분리, 배양 및 확장된 중요한 유형의 세포입니다. 이들은 주로 뇌 미세혈관의 벽에 분포하며 혈액-뇌 장벽의 핵심 구성 요소를 구성합니다. BMEC는 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 물질 교환을 조절하고, 뇌의 내부 환경을 안정시키고, 외부 세계에서 유해 물질의 침입을 방어하는 데 중요한 역할을 합니다. 이들은 뇌혈관 기능과 질병 메커니즘을 연구하는 데 중요한 세포 모델입니다.

실험 재료

실험 동물: SD 쥐(4-6주령, 수컷)

도구 및 소모품: 대형 수술용 가위, 집게, 50mL 원심분리관, 6웰 플레이트

시약 및 용액: 75% 에탄올, 식염수, 콜라겐 분해 효소, 25% BSA, 폴리리신

배지: DMEM/F12 기저 배양 배지, DMEM/F12 완전 배양 배지

실험실 기구

초청정 벤치: 무균 작업용

저속 원심분리기: 세포 분리용

CO2 인큐베이터: 세포 배양에 적합한 환경 제공

실험 절차

실험 동물 취급

●쥐를 마취한 후, 표면 소독을 위해 75% 에탄올에 약 1분간 담가둡니다.

뇌 채취

● 머리의 피부를 잘라내고, 뇌를 빠르고 완전히 제거한 후, 미리 냉각시킨 DMEM/F12 기저 배양 배지에 넣습니다.

세척 티슈

● 깨끗한 벤치에서 뇌의 바깥쪽 혈전, 뇌막, 바깥쪽 혈관을 제거합니다(접시에서 수술).

● 백색질(느슨한 구조)을 제거하고 회색질(껍질 모양의 좌우 뇌 부분)을 유지합니다.

세척

●4°C 미리 냉각된 배양 배지를 사용하여 뇌 조직을 반복적으로 세척하여 불순물을 제거합니다.

절단 및 예비 처리

●뇌 조직을 약 1mm³의 작은 조각으로 자르고 멸균된 50mL 원심분리관으로 옮깁니다.

●조직을 더 잘게 자르고 부드럽게 피펫으로 조직 조각을 분산시킵니다.

원심분리

● 실온에서 900rpm으로 4분간 원심분리하고 상층액을 버립니다. 혈청이 없는 DMEM/F12 배지 5mL를 넣고 피펫으로 완전히 섞습니다.

● 배지 10mL와 콜라겐 분해효소 II 100μL를 넣고 37°C에서 30~45분간 소화합니다.

6-well 플레이트 준비

●동시에 1 mL의 폴리리신을 사용하여 6-well 플레이트를 코팅하고 37°C에서 배양합니다.

소화 후 처리

●소화 후 배지를 첨가하여 중화시키고, 실온에서 900rpm으로 10분간 원심분리하고, 상층액을 버립니다.

●25% BSA 용액 15mL을 첨가하고 실온에서 2000rpm으로 20분간 원심분리합니다.

표적 세포 추출

● 원심분리 후 층화가 보입니다. 아래 층의 진한 붉은색 침전물은 뇌 미세혈관 세포입니다.

● 6웰 플레이트의 폴리-L-리신을 식염수로 부드럽게 헹군 후 세척을 두 번 반복합니다.

세포 재부유 및 배양

● 하부 뇌 미세혈관 침전물을 제거하고 생리식염수를 넣고 잘 섞은 다음 실온에서 900rpm으로 5분간 원심분리합니다.

● 신선한 DMEM/F12 완전 배지로 세포를 재부유시키고 코팅된 6웰 플레이트로 옮긴 다음 인큐베이터에서 배양합니다.

이 실험 절차를 통해 우리는 쥐 뇌 미세혈관 내피 세포를 성공적으로 추출하고 분리하여 추가 연구를 위한 견고한 실험적 기반을 제공했습니다. 이 과정 전반에 걸쳐 저속 원심분리기는 세포를 효율적으로 분리하고 표적 세포 집단을 정제하는 데 도움이 되는 핵심 도구입니다. 실험의 정확성과 안전성을 보장하기 위해 Welso는 작업자가 참조할 수 있도록 저속 원심분리기의 일부 작동 지점을 편집했습니다.

장비 검사 및 배치

● 진동이나 기울기로 인한 불안정성을 피하기 위해 원심분리기가 단단한 테이블에 안정적으로 놓여 있는지 확인하십시오.

● 사용 전에 장비를 점검하고 로터와 씰을 점검하여 손상이나 느슨함이 없는지 확인하는 데 집중하십시오.

작동 보호

● 액체가 튀는 것을 방지하고 피부와 눈에 손상을 입히지 않도록 작동 중 보호 안경과 실험실 장갑을 착용하십시오.

속도 및 부하

● 장비의 최대 속도 및 최대 부하에 주의하고 원심분리기의 부하 범위를 초과하지 마십시오.

● 실험 요구 사항에 따라 적절한 원심분리 속도 및 시간을 선택하십시오. 속도 및 시간은 샘플 밀도, 분리 목적 및 부피에 따라 조정하여 부적절한 매개 변수 설정으로 인해 분리 효과에 영향을 미치지 않도록 해야 합니다.

샘플 준비 및 적재

● 샘플이 원심분리기에 들어가기 전에 원심분리관, 뚜껑, 버킷 및 어댑터가 저울에 정확하게 균형을 이루고 있는지 확인하십시오. 중량 허용 오차는 일반적으로 1g 이하이고 정밀도 요구 사항은 0.1g 이하이며 장비 설명서의 요구 사항을 충족합니다.

● 원심분리관에 채워진 재료는 하중 분포가 고르지 않아 진동이 발생하지 않도록 밀도가 비슷해야 합니다.

● 샘플 용량은 장비가 불균형하거나 손상되는 것을 방지하기 위해 원심분리관 또는 로터의 최대 용량 한도를 초과해서는 안 됩니다.

● 원심력이 고르게 분포되도록 샘플을 로터에 대칭적으로 놓아야 합니다.

작동 사양

●원심분리기가 작동 중일 때는 우발적인 부상을 방지하기 위해 뚜껑을 열거나 닫는 것이 금지되어 있습니다.

●원심분리 후 뚜껑을 열기 전에 로터가 완전히 멈췄는지 확인하십시오. 샘플을 꺼낼 때는 고온 샘플 튜브나 튀는 액체에 닿지 않도록 주의하십시오.

세척 및 유지관리

●사용 후 장비와 로터를 제때 세척하여 장비를 깨끗하게 유지하고 오염이나 부식을 방지합니다.

●원심분리기의 작동 상태를 정기적으로 점검하여 장비의 장기적인 안정성과 신뢰성을 보장합니다.

●위의 예방 조치를 따르면 실험 작업의 안전을 보장하고 장비의 수명을 연장할 수 있습니다.

원심분리기는 많은 세포 분리 및 추출 실험에 필수적입니다. 원심분리기 작동 사양을 엄격히 따르면 실험의 안전을 보장할 수 있을 뿐만 아니라 장비의 수명을 연장하고 실험 결과의 신뢰성을 보장할 수 있습니다. Welso는 전문적인 원심분리기 공급업체입니다. 저희 제품 페이지를 통해 저속 원심분리기의 자세한 특징과 기술적 매개변수에 대해 자세히 알아볼 수 있습니다. 또한 가장 적합한 견적을 받으려면 언제든지 저희에게 연락해 주시기 바랍니다.