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마이크로플레이트 리더는 단백질 농도 측정 및 기타 생화학 실험에 널리 사용되는 일반적인 실험실 기기입니다. 그 원리는 특정 파장에서 샘플 용액의 빛 흡광도를 측정하여 샘플의 대상 물질의 농도를 결정하는 빛 흡광도 방법을 기반으로 합니다. 마이크로플레이트 리더를 사용할 때 샘플의 단백질 또는 기타 생화학 물질은 일반적으로 특정 색상 시약과 반응하여 특정 빛 흡수 특성을 가진 제품을 생성합니다. 이 기기는 특정 파장의 빛을 방출하고 샘플을 통과한 후 검출기는 투과된 빛의 강도를 측정합니다.

흡광도를 표준 곡선과 비교함으로써 샘플 내 표적 물질의 농도를 정확하게 계산할 수 있습니다. 표준 곡선은 일반적으로 알려진 농도의 일련의 표준 샘플로 구성되며, 흡광도는 마이크로플레이트 리더를 교정하여 측정 결과의 정확성을 보장하는 데 사용됩니다. 마이크로플레이트 리더의 높은 감도와 높은 정밀도는 단백질 농도 측정, 효소 활성 분석 및 세포 증식 실험과 같은 생화학 실험에 필수적인 도구입니다.

단백질은 생물체에서 중요한 생체거대분자이며, 그 함량 결정은 생물학 연구 및 생명공학 산업에서 매우 중요합니다. 마이크로플레이트 리더는 효소 촉매 반응에 의해 생성된 색상 변화를 기반으로 대상 분자를 정량적으로 분석하는 생체 분자의 농도를 감지하는 데 사용되는 정밀 기기입니다.

웰소는 단백질 농도를 측정하기 위해 BCA 방법(비색법)을 공유했습니다. 원리는 단백질이 알칼리성 조건에서 구리 이온(Cu²⁺)과 반응하여 보라색-파란색 복합체를 형성한다는 것입니다. 이 복합체는 특정 파장(일반적으로 562nm)에서 특징적인 흡수 피크를 가지며, 흡광도는 샘플의 단백질 농도에 선형적으로 비례합니다. 효소 판독기로 흡광도를 측정하고 표준 곡선과 비교하면 샘플의 단백질 농도를 정확하게 계산할 수 있습니다. 이 방법은 높은 감도와 간단한 조작으로 인해 단백질 농도를 빠르게 측정하는 데 널리 사용됩니다.

실험 목적 

마이크로플레이트 리더의 사용법을 마스터하고 작동 프로세스와 기능에 익숙해지세요.

단백질 정량 분석의 기본 원리와 작동 단계를 배우세요.

BCA 방법으로 단백질 농도를 측정하고 실험 결과의 정확성을 검증하세요.

실험재료 및 기구 

재료

표준 단백질 용액(예: 소 혈청 알부민)

테스트할 단백질 용액 샘플

BCA 용액

96웰 마이크로플레이트

시약 

황산구리

황산나트륨

수산화나트륨 등

악기 

ELISA 판독기

전자 저울

피펫

온도 조절 수조

실험 단계 

●표준곡선 설정

A. 키트 지침에 따라 BCA 용액을 준비합니다.

B. 단백질 표준 용액을 탈이온수로 다른 농도 구배(예: 0, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256 ug/mL)로 희석합니다.

C. 희석된 표준 용액을 각 96웰 마이크로플레이트에 웰당 100μL씩 넣습니다.

D. 각 웰에 100μL BCA 용액을 넣고 잘 섞습니다.

E. 마이크로플레이트를 ELISA 판독기에 넣고 파장 562nm에서 흡광도 값을 측정합니다.

수평 축이 단백질 농도이고 수직 축이 흡광도 값인 표준 곡선을 설정합니다.

●샘플결정

A. 테스트할 단백질 샘플을 탈이온수로 적절한 농도로 희석합니다.

B. 희석된 샘플을 96웰 마이크로플레이트에 각 웰에 100 μL씩 넣습니다.

C. 각 웰에 BCA 용액 100 μL를 넣고 잘 섞습니다.

D. 마이크로플레이트를 ELISA 판독기에 넣고 파장 562 nm에서 흡광도 값을 측정합니다.

●결과분석

측정된 시료의 흡광도 값을 토대로 표준곡선에서 해당 단백질을 찾은 후, 시료의 양에 따라 시료용액의 단백질 농도를 계산합니다.

BCA 방법은 간단한 조작, 높은 감도 및 강력한 특이성이라는 장점이 있는 일반적으로 사용되는 단백질 정량 분석 방법입니다. 실험 중에는 결과의 정확성을 보장하기 위해 단백질 변성, 분해 및 오염을 방지하는 데 특별한 주의를 기울여야 합니다. 이 실험의 결과는 BCA 방법이 단백질 샘플의 농도를 효과적으로 결정하고 후속 단백질 연구에 대한 신뢰할 수 있는 데이터 지원을 제공할 수 있음을 보여줍니다.

본 실험에서는 ELISA 기구와 BCA 방법을 성공적으로 활용하여 단백질 시료의 농도를 측정하고, 방법의 타당성을 검증하였으며, 단백질 정량 분석을 위한 중요한 참고 자료를 제공하였습니다.