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神経科学の分野では、脳血管および微小血管内皮細胞の機能の研究は、脳の正常な生理学的プロセスと疾患発症のメカニズムを理解する上で極めて重要です。初代脳微小血管内皮細胞抽出技術は、主に動物モデルからこれらの細胞を取得することにより、内皮細胞の構造、機能、相互作用を深く探究するために広く使用されています。この技術は、関連疾患の発症機序の研究や標的治療薬の開発に重要な参考資料を提供し、脳血管疾患および神経変性疾患の分野における科学的進歩を促進します。

また、低速遠心分離機を使用して脳微小血管内皮細胞（BMEC）を分離および抽出するための実験プロトコルを慎重にまとめました。この記事は、実験担当者に簡潔でわかりやすい技術ガイドを提供し、実験の重要な手順と注意事項を詳細に示し、科学研究者が操作の重要なポイントを迅速に習得できるようにすることを目的としています。この共有を通じて、関連分野の研究に実用的なガイダンスとサポートを提供し、脳血管および神経科学の研究の進歩を加速できることを願っています。

BMEC の紹介

一次脳微小血管内皮細胞 (BMEC) は、脳組織から分離、培養、増殖される重要な種類の細胞です。主に脳微小血管の壁に分布し、血液脳関門のコア構成要素を構成します。BMEC は、血液脳関門を介した物質交換の調節、脳の内部環境の安定性の維持、外界からの有害物質の侵入に対する防御において重要な役割を果たします。BMEC は、脳血管機能と疾患メカニズムを研究するための重要な細胞モデルです。

実験材料

実験動物: SD ラット (4～6 週齢、オス)

器具および消耗品: 大型外科用ハサミ、鉗子、50 mL 遠心管、6 ウェル プレート

試薬および溶液: 75% エタノール、生理食塩水、コラーゲナーゼ、25% BSA、ポリリジン

培養培地: DMEM/F12 基礎培養培地、DMEM/F12 完全培養培地

実験器具

超クリーンベンチ: 無菌操作用

低速遠心分離機: 細胞分離用

CO2インキュベーター: 細胞培養に適した環境を提供

実験手順

実験動物の取り扱い

●ラットを麻酔後、表面消毒のため75%エタノールに約1分間浸します。

脳の採取

●頭部の皮膚を切開し、脳を素早く完全に摘出し、予め冷却したDMEM/F12基礎培地に入れます。

組織の洗浄

●クリーンベンチで、脳の外側の血栓、髄膜、外側の血管を取り除きます（シャーレで操作します）。

●白質（ゆるい構造）を取り除き、灰白質（殻状の左右の脳部分）を残します。

洗浄

●不純物を取り除くため、4℃に冷却した培地で脳組織を繰り返し洗浄します。

切断と予備処理

●脳組織を約1mm³の小片に切り、滅菌した50mL遠心管に移します。

●組織をさらに細かく切り、軽くピペッティングして組織片を分散させます。

遠心分離

●室温で900rpmで4分間遠心分離し、上清を捨てます。無血清DMEM/F12培地5mLを加え、ピペットでよく混ぜます。

●培地10mLとコラーゲナーゼII 100μLを加え、37℃で30～45分間消化します。

6ウェルプレートの準備

●同時に、ポリリジン1mLを使用して6ウェルプレートをコーティングし、37℃でインキュベートします。

消化後処理

●消化後、培地を加えて中和し、室温で900rpmで10分間遠心分離し、上清を捨てます。

●25% BSA溶液15mLを加え、室温で2000rpmで20分間遠心分離します。

標的細胞の抽出

● 遠心分離後、層別化が確認できます。下層の暗赤色の沈殿物は脳微小血管細胞です。

● 6 ウェル プレート内のポリ L-リジンを生理食塩水で軽くすすぎ、洗浄を 2 回繰り返します。

細胞の再懸濁と培養

● 脳微小血管の下層の沈殿物を取り除き、生理食塩水を加えてよく混ぜ、室温で 900 rpm で 5 分間遠心分離します。

● 新鮮な DMEM/F12 完全培地で細胞を再懸濁し、コーティングされた 6 ウェル プレートに移し、インキュベーターで培養します。

この実験手順により、ラットの脳微小血管内皮細胞を抽出して分離することに成功し、さらなる研究のための確固たる実験基盤ができました。プロセス全体を通じて、低速遠心分離機は、細胞を効率的に分離し、標的細胞集団を精製するのに役立つ重要なツールです。実験の正確性と安全性を確保するために、Welso は低速遠心分離機の操作ポイントをいくつかまとめ、オペレーターの参考としています。

機器の点検と配置

●振動や傾きによる不安定さを避けるため、遠心分離機がしっかりとしたテーブルの上に安定して置かれていることを確認してください。

●使用前に機器を点検し、ローターとシールの点検に重点を置き、損傷や緩みがないことを確認してください。

操作保護

●操作中は保護メガネと実験用手袋を着用し、液体が飛び散って皮膚や目に損傷を与えないようにしてください。

速度と負荷

●機器の最大速度と最大負荷に注意し、遠心分離機の負荷範囲を超えないようにしてください。

●実験要件に応じて適切な遠心分離速度と時間を選択します。不適切なパラメータ設定による分離効果への影響を避けるために、サンプルの密度、分離目的、容量に応じて速度と時間を調整する必要があります。

サンプルの準備と充填

●サンプルが遠心分離機に入る前に、遠心分離管、蓋、バケット、アダプタが天秤上で正確にバランスが取れていること、重量許容誤差が通常 1g 以下、精度要件が 0.1g 以下、機器マニュアルの要件を満たしていることを確認してください。

●遠心分離管に充填された材料は、不均一な負荷分散による振動を避けるために、同様の密度でなければなりません。

●機器のバランスが崩れたり損傷したりしないように、サンプル容量は遠心分離管またはローターの最大容量制限を超えてはなりません。

●遠心力が均等に分散されるように、サンプルはローターに対称的に配置するようにしてください。

操作仕様

●事故による怪我を避けるため、遠心分離機の稼働中に蓋を開閉することは禁止されています。

●遠心分離後、蓋を開ける前にローターが完全に停止していることを確認してください。サンプルを取り出す際は、高温のサンプルチューブや液体の飛散に触れないように注意してください。

清掃とメンテナンス

●使用後は、機器とローターを適時に清掃して、機器を清潔に保ち、汚染や腐食を防ぎます。

●遠心分離機の動作状態を定期的にチェックして、機器の長期的な安定性と信頼性を確保します。

●上記の注意事項に従うことで、実験操作の安全性を確保し、機器の寿命を延ばすことができます。

遠心分離機は、多くの細胞分離および抽出実験に不可欠です。遠心分離機の動作仕様を厳密に遵守することで、実験の安全性が確保されるだけでなく、機器の耐用年数が延び、実験結果の信頼性が確保されます。Welso はプロの遠心分離機サプライヤーです。低速遠心分離機の詳細な機能と技術的パラメータについては、当社の製品ページをご覧ください。また、いつでもご連絡いただければ、最適な見積もりをお送りします。