Le blog

Les macrophages jouent un rôle essentiel dans le système immunitaire de l'organisme. Ils jouent un rôle important dans la phagocytose des agents pathogènes, la régulation des réponses immunitaires et le maintien de l'homéostasie tissulaire. Grâce à la méthode d'extraction primaire, les chercheurs peuvent éviter les modifications génétiques et le déclin fonctionnel qui peuvent être causés par de multiples passages de lignées cellulaires et obtenir directement des macrophages avec une activité biologique complète à partir d'organismes vivants, ce qui constitue une base solide pour les expériences ultérieures.

Les macrophages primaires dérivés de la moelle osseuse sont généralement ronds ou ovales lorsqu'ils ne sont pas stimulés, avec des tailles de cellules variables, de petits noyaux, généralement ronds ou ovales, une chromatine lâche et des nucléoles évidents. Les vacuoles et les substances granulaires sont courantes dans le cytoplasme, et ces structures sont étroitement liées à leur fonction phagocytaire.

Les centrifugeuses jouent un rôle essentiel dans le processus d'extraction des cellules BMDM. Grâce à l'étape de centrifugation, nous pouvons séparer et précipiter efficacement les cellules pour obtenir des macrophages de moelle osseuse de haute qualité. Le processus de centrifugation permet non seulement d'éliminer les impuretés, mais garantit également la pureté et l'activité des cellules, ce qui est un maillon clé indispensable dans le processus d'extraction.

Voici les étapes détaillées et les précautions à prendre pour la méthode d’extraction primaire des macrophages en utilisant des souris comme exemple :

Préparation du matériel expérimental

Animaux d'expérimentation : souris C57BL/J

Réactifs : milieu de culture DMEM à haute teneur en glucose contenant 10 % de FBS, 75 % d'éthanol, PBS stérile.

Matériel expérimental : seringues jetables, instruments chirurgicaux, tubes à centrifuger, centrifugeuses, plaques ou flacons de culture cellulaire, etc.

Étapes expérimentales

●Anesthésie et mise à mort : après anesthésie, les souris ont été tuées rapidement et humainement par dislocation, en suivant l'éthique des expériences sur les animaux et en minimisant la douleur des souris.

●Désinfection de surface : faire tremper les souris dans un bécher contenant 75 % d'éthanol pendant 5 minutes. Après une désinfection complète, utiliser une serviette en papier propre pour absorber l'excès d'alcool.

●Traitement de la peau et des articulations : utiliser des ciseaux stérilisés pour couper une petite incision sur le dos de la souris, déchirer la peau jusqu'à l'articulation du mollet à mains nues et retirer l'articulation du pied et la peau.

●Prélèvement des pattes et désinfection secondaire : utiliser des ciseaux stérilisés pour démonter soigneusement les membres postérieurs du grand trochanter à la racine de la cuisse pour éviter les fractures. Après avoir retiré les muscles, faire tremper les os des pattes dans une boîte de culture à 75 % d'éthanol pendant 5 minutes.

●Après 5 minutes, retirez les os des jambes de la boîte de culture d’éthanol, placez-les dans une nouvelle boîte de culture d’éthanol et déplacez-les vers le banc propre pour fournir un environnement stérile pour les expériences ultérieures.

Extraction et induction de cellules BMDM

● Prétraitement des os de la jambe : Transférer les os de la jambe de souris imbibés d'éthanol dans un récipient rempli de PBS froid, immerger complètement et rincer l'éthanol sur la surface de l'os avec du PBS, répéter 3 fois pour assurer un nettoyage complet.

● Extraction de moelle osseuse : Séparer le fémur et le tibia nettoyés, et couper les deux extrémités avec des ciseaux stérilisés. Utiliser une seringue de 1 ml pour absorber le milieu d'induction à froid, viser l'extrémité de l'os et souffler la moelle osseuse, puis souffler et laver à plusieurs reprises pendant environ 3 fois jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de résidu de moelle osseuse rouge évident dans l'os de la jambe.

● Dispersion et filtration des cellules : Utiliser une pipette de 5 ml pour souffler doucement le milieu contenant les cellules de moelle osseuse afin de disperser les amas de cellules. Filtrer la suspension à travers un filtre cellulaire de 70 μm pour éliminer les impuretés et transférer le filtrat dans un tube à centrifuger de 15 ml.

● Centrifugation et remise en suspension : Centrifuger à 1 500 tr/min pendant 5 minutes et jeter le surnageant. Ajoutez du tampon de lyse des globules rouges pour remettre les cellules en suspension, laissez reposer pendant 5 minutes, puis centrifugez à la même vitesse pendant 5 minutes et jetez le surnageant. Enfin, remettez le culot cellulaire en suspension avec du milieu d'induction à froid.

● Culture cellulaire et remplacement du milieu : placez les cellules en plaque selon les besoins. Le troisième jour, la moitié du milieu de culture a été remplacée pour maintenir un environnement de culture stable ; le cinquième jour, une quantité complète de milieu de culture frais a été remplacée pour répondre aux besoins de croissance et de différenciation cellulaires ; le septième jour, les cellules ont atteint un état utilisable.

Remarques

●Les cellules BMDM ne peuvent pas être passées : en raison des caractéristiques biologiques particulières des cellules BMDM, elles ne sont pas adaptées aux opérations de passage.

●Évitez la digestion à la trypsine : la trypsine est souvent utilisée pour séparer les cellules adhérentes, mais elle ne convient pas aux cellules BMDM. L'activité protéolytique de la trypsine détruira la membrane cellulaire et les protéines clés, provoquant l'inactivation des cellules et leur inutilisation pour les expériences ultérieures. Par conséquent, n'utilisez pas de trypsine pour traiter les cellules BMDM.

●Il est recommandé d'utiliser un grattoir à cellules : en raison des limitations du passage et de la digestion à la trypsine, il est recommandé d'utiliser un grattoir à cellules pour gratter délicatement les cellules BMDM.

●Évitez les changements fréquents de récipients de culture : les cellules BMDM sont fragiles et sensibles à l'environnement. Il est recommandé de les plaquer directement pour les expériences après l'acquisition. Les changements fréquents de récipients de culture peuvent provoquer des perturbations physiques, provoquant des collisions et des tirages de cellules, endommageant ainsi les cellules et interférant avec les résultats expérimentaux.

Ce qui précède est le processus détaillé d'extraction de cellules BMDM qui sera utile aux utilisateurs. Dans les expériences biologiques, Welso peut vous fournir tous les instruments expérimentaux dont vous avez besoin. Il convient de mentionner en particulier que notre série de centrifugeuses est un assistant indispensable dans l'expérience. Nous nous concentrons sur la fourniture de produits de centrifugeuse de haute qualité aux clients du monde entier, notamment des centrifugeuses à basse vitesse, des centrifugeuses à grande vitesse, des centrifugeuses réfrigérées, des mini-centrifugeuses et des centrifugeuses au sol de grande capacité. Si vous êtes intéressé par nos produits, veuillez nous contacter à temps et vous obtiendrez le meilleur devis.