مدونات

تلعب الخلايا البلعمية دورًا مهمًا في الجهاز المناعي للجسم، حيث تلعب دورًا مهمًا في التهام مسببات الأمراض وتنظيم الاستجابات المناعية والحفاظ على توازن الأنسجة. ومن خلال طريقة الاستخلاص الأولية، يمكن للباحثين تجنب التغيرات الجينية والتدهور الوظيفي الذي قد يحدث نتيجة مرور سلالات الخلايا بشكل متكرر، والحصول بشكل مباشر على الخلايا البلعمية ذات النشاط البيولوجي الكامل من الكائنات الحية، وهو ما يشكل أساسًا متينًا للتجارب اللاحقة.

تكون الخلايا البلعمية الأولية المشتقة من نخاع العظم مستديرة أو بيضاوية الشكل عادةً عندما لا يتم تحفيزها، مع أحجام خلايا متفاوتة، ونوى صغيرة، مستديرة أو بيضاوية الشكل في الغالب، وكروماتين فضفاض، ونويات واضحة. الفجوات والمواد الحبيبية شائعة في السيتوبلازم، وهذه الهياكل وثيقة الصلة بوظيفتها البلعمية.

تلعب أجهزة الطرد المركزي دورًا حيويًا في عملية استخراج خلايا BMDM. من خلال خطوة الطرد المركزي، يمكننا فصل الخلايا وترسيبها بشكل فعال للحصول على خلايا بلعمية عالية الجودة من نخاع العظم. لا تساعد عملية الطرد المركزي في إزالة الشوائب فحسب، بل تضمن أيضًا نقاء الخلايا ونشاطها، وهو رابط أساسي لا غنى عنه في عملية الاستخراج.

وفيما يلي الخطوات التفصيلية والاحتياطات اللازمة لطريقة استخلاص الخلايا البلعمية الأولية باستخدام الفئران كمثال:

إعداد المواد التجريبية

الحيوانات التجريبية: فئران C57BL/J

الكواشف: وسط زراعة الجلوكوز العالي DMEM الذي يحتوي على 10% FBS، 75% إيثانول، PBS معقم.

المعدات التجريبية: الحقن التي تستخدم لمرة واحدة، الأدوات الجراحية، أنابيب الطرد المركزي، أجهزة الطرد المركزي، أطباق زراعة الخلايا أو قوارير الزراعة، إلخ.

الخطوات التجريبية

● التخدير والقتل: بعد تخدير الفئران، تم قتلها بسرعة وبطريقة إنسانية عن طريق الخلع، مع مراعاة أخلاقيات التجارب على الحيوانات وتقليل آلام الفئران.

● تطهير السطح: انقع الفئران في كوب يحتوي على 75% إيثانول لمدة 5 دقائق. بعد التطهير الكامل، استخدم منشفة ورقية نظيفة لامتصاص الكحول الزائد.

● علاج الجلد والمفاصل: استخدم مقصًا معقمًا لقطع شق صغير في ظهر الفأر، وتمزيق الجلد حتى مفصل الساق باليدين العاريتين، وإزالة مفصل القدم والجلد.

● أخذ عينات من الساق والتطهير الثانوي: استخدم مقصًا معقمًا لتفكيك الأطراف الخلفية بعناية من الحدبة الكبرى عند جذر الفخذ لتجنب الكسور. بعد إزالة العضلات، انقع عظام الساق في طبق زراعة يحتوي على 75% إيثانول لمدة 5 دقائق.

●بعد 5 دقائق، أخرج عظام الساق من طبق ثقافة الإيثانول، وضعها في طبق ثقافة الإيثانول الجديد، ثم انقلها إلى المقعد النظيف لتوفير بيئة معقمة للتجارب اللاحقة.

استخراج خلايا BMDM وتحريضها

● المعالجة المسبقة لعظام الساق: انقل عظام ساق الفأر المنقوعة في الإيثانول إلى حاوية مملوءة بـ PBS البارد، واغمر الإيثانول على سطح العظم بالكامل بـ PBS واشطفه، وكرر ذلك 3 مرات لضمان التنظيف الشامل.

● استخراج نخاع العظم: افصل عظم الفخذ والساق المنظفين، واقطع كلا الطرفين بمقص معقم. استخدم حقنة سعة 1 مل لامتصاص وسط التحريض البارد، ووجهها نحو نهاية العظم وانفخ نخاع العظم، وانفخ واغسل بشكل متكرر لمدة 3 مرات تقريبًا حتى لا يوجد بقايا واضحة لنخاع العظم الأحمر في عظم الساق.

● تشتت الخلايا والترشيح: استخدم ماصة سعة 5 مل لنفخ الوسط المحتوي على خلايا نخاع العظم برفق لتفريق كتل الخلايا. قم بتصفية المعلق من خلال مرشح خلايا 70 ميكرومتر لإزالة الشوائب، ونقل المرشح إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل.

● الطرد المركزي وإعادة التعليق: قم بالطرد المركزي بسرعة 1500 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق وتخلص من السائل العلوي. أضف محلول تحلل خلايا الدم الحمراء لإعادة تعليق الخلايا، واتركه لمدة 5 دقائق، ثم قم بالطرد المركزي بنفس السرعة لمدة 5 دقائق وتخلص من السائل العلوي. أخيرًا، أعد تعليق حبيبات الخلايا باستخدام وسط تحريض بارد.

● زراعة الخلايا واستبدال الوسط: ضع الخلايا في طبق حسب الحاجة. في اليوم الثالث، تم استبدال نصف وسط الثقافة للحفاظ على بيئة ثقافة مستقرة؛ في اليوم الخامس، تم استبدال كمية كاملة من وسط الثقافة الطازج لتلبية احتياجات نمو الخلايا وتمايزها؛ في اليوم السابع، وصلت الخلايا إلى حالة قابلة للاستخدام.

ملاحظات

●لا يمكن تمرير خلايا BMDM: نظرًا للخصائص البيولوجية الخاصة لخلايا BMDM، فهي غير مناسبة لعمليات المرور.

●تجنب هضم التربسين: غالبًا ما يستخدم التربسين لفصل الخلايا الملتصقة، لكنه غير مناسب لخلايا BMDM. سيؤدي النشاط البروتيني للتربسين إلى تدمير غشاء الخلية والبروتينات الرئيسية، مما يتسبب في تعطيل الخلية وعدم استخدامها للتجارب اللاحقة. لذلك، لا تستخدم التربسين لعلاج خلايا BMDM.

●يوصى باستخدام مكشطة الخلايا: نظرًا لقيود المرور وهضم التربسين، يوصى باستخدام مكشطة الخلايا لكشط خلايا BMDM برفق.

●تجنب التغييرات المتكررة لحاويات الثقافة: خلايا BMDM هشة وحساسة للبيئة. يوصى بطبقها مباشرة للتجارب بعد الحصول عليها. قد تتسبب التغييرات المتكررة لحاويات الثقافة في حدوث اضطرابات جسدية، مما يتسبب في تصادم الخلايا وسحبها، وبالتالي إتلاف الخلايا والتدخل في النتائج التجريبية.

ما سبق هو عملية مفصلة لاستخراج خلايا BMDM والتي ستكون مفيدة للمستخدمين. في التجارب البيولوجية، يمكن لشركة Welso أن تزودك بجميع الأدوات التجريبية التي تحتاجها. ومن الجدير بالذكر بشكل خاص أن سلسلة أجهزة الطرد المركزي الخاصة بنا هي مساعد لا غنى عنه في التجربة. نحن نركز على توفير منتجات أجهزة الطرد المركزي عالية الجودة للعملاء العالميين، بما في ذلك أجهزة الطرد المركزي منخفضة السرعة وأجهزة الطرد المركزي عالية السرعة وأجهزة الطرد المركزي المبردة وأجهزة الطرد المركزي الصغيرة وأجهزة الطرد المركزي الأرضية ذات السعة الكبيرة. إذا كنت مهتمًا بمنتجاتنا، فيرجى الاتصال بنا في الوقت المناسب وستحصل على أفضل عرض أسعار.